CSL载体构建表达纯化及活性鉴定

• 作者: 周诗 曾晓荣 王一妃 胡慧媛 苏敬阳 郝丽英 雷帅
• 来源期刊: 解剖科学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 钙蛋白酶抑素 pull down assay 质粒构建
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 644-647
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.16695/j.cnki.1006-2947.2018.06.023

摘要

目的 构建Calpastatin N末端结构域Calpastatin domain L(CSL)(a.a.150-230)融合蛋白质粒,表达、提取、纯化CSL蛋白并进行生物学活性鉴定.方法 将CSL的cDNA片段插入pGEX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,大量培养后用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导蛋白表达,超声破碎法提取CS;蛋白.利用Glutathione-Sepharose 4B(GS-4B)beads和PreScission蛋白酶分离纯化蛋白,pull down assay检测其生物学活性.结果 CSL质粒经测序比对后表明构建成功;超声破碎法提取的CSL蛋白纯度和浓度均较高,并具有能够与GST-CT1融合蛋白浓度依赖性结合的生物学活性.结论 成功构建CSL融合蛋白质粒,提取纯化具有生物活性的CSL蛋白,为探讨Cav1.2钙通道自身调节机制奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝丽英		56	146	6.0	9.0
2	胡慧媛		32	127	6.0	9.0
3	苏敬阳		6	3	1.0	1.0
4	周诗		2	4	1.0	2.0
5	曾晓荣		3	0	0.0	0.0
6	雷帅		1	0	0.0	0.0
7	王一妃		1	0	0.0	0.0