ELP30-tag蛋白纯化能力的原核表达研究

• 作者: 祁润 豆晓雪 赵爱春 陈远侨 龙定沛
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 类弹性蛋白 内含肽 增强绿色荧光蛋白 原核表达 蛋白质纯化
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 54-60
• 页数: 7页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180208

摘要

目的:探究一种小分子量类弹性蛋白标签(elastin-like protein tag,ELP tag)——ELP30-tag在原核表达系统中的蛋白纯化能力.方法:人工合成ELP30-tag基因并将其构建于pET-28a(+)载体,结合2种内含肽(intein1和intein2)基因和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)基因,构建4个含有不同元件序列的原核表达载体:pET-ELP30、pET-ELP30-eGFP、pET-ELP30-intein1-eGFP和pET-eGFP-intein2-ELP30;将表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,并通过可逆相变循环(inverse transition cycling,ITC)纯化重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP、ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30,随后通过调节溶液pH值或添加二硫苏糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)分别诱导intein1和intein2断裂,最后再经ITC分离获得纯eGFP.结果:利用设计的ELP30-tag成功纯化获得了重组蛋白ELP30、ELP30-eGFP和eGFP-intein2-ELP30;重组蛋白ELP30-intein1-eGFP和eGFP-intein2-ELP30中的内含肽可经诱导发生断裂而释放eGFP,但未能分离获得纯eGFP.由此为小分子量ELP-tag的运用和优化设计奠定了一定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵爱春	家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院	3	34	2.0	3.0
2	陈远侨	家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院	1	0	0.0	0.0
3	龙定沛	家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院	1	0	0.0	0.0
4	豆晓雪	家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院	1	0	0.0	0.0
5	祁润	家蚕基因组生物学国家重点实验室西南大学生物技术学院	1	0	0.0	0.0