人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化

• 作者: 喻放 左振宇 杨忠华 范汉东
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 白细胞介素24 质粒构建 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 84-89
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.02.011

摘要

构建人白细胞介素24(IL-24)原核表达载体并利用ELP-Intein系统表达纯化可溶性的IL-24蛋白.通过PCR扩增不合信号肽的人IL-24基因,将IL-24基因插入pET-ELP-Intein质粒构建重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24.将重组质粒转化至E.coliBLR(DE3),20℃下经IPTG诱导表达.利用ELP蛋白在不同温度下发生相变的特点和Intein蛋白的自切割反应纯化可溶性IL-24蛋白,将纯化得到的IL-24蛋白进行Western blot鉴定.用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测IL-24蛋白的生物学活性.成功构建了重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24,第一次通过原核表达方法表达并纯化出了可溶性的IL-24蛋白.Western blot检测显示目的蛋白能与IL-24抗体特异性结合,表明纯化出的蛋白确实为IL-24蛋白.细胞凋亡检测实验证明IL-24蛋白能显著地诱导hepG2细胞发生凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨忠华		33	295	10.0	16.0
2	左振宇		13	25	3.0	4.0
3	喻放		3	6	2.0	2.0
4	范汉东	杭州师范大学衰老研究所	1	1	1.0	1.0