PPRV Nigeria75/1H蛋白原核表达及抗原表位预测

• 作者: 常秋燕 李林杰 柏家林 王悦萦 马晓霞 马鹏
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 H蛋白 原核表达 B细胞抗原表位
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 页码范围: 111-116
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4507字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2018.05.016

摘要

克隆并原核表达小反刍兽疫病毒弱毒疫苗株血凝素蛋白(H)全长基因,并通过生物信息学的方法预测其B抗原表位.根据NCBI中PPRV基因组序列中H基因序列(GenBank X74443)设计一对引物,采用RT-PCR方法扩增其全长;将扩增产物克隆至原核表达载体pET-32a后,转化至大肠杆菌E.coli Rosetta,经IPTG 37℃诱导表达目的蛋白;表达的目的蛋白经带His标签的镍离子蛋白纯化柱纯化后,进行Western Blot鉴定.利用DNAStar软件采用生物信息学的方法预测其H蛋白潜在的抗原表位.结果显示,质粒pET-32a-H经双酶切鉴定及测序后可证明构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约67 ku,能被抗His标签抗体识别,主要以包涵体形式存在,有少量可溶性表达.通过生物信息学软件DNAStar成功找到H蛋白的潜在抗原表位5-8,14-16,73-75,83-90,125-131,142-147,170-177,236-245,281-285,312-317,360-363,370-379,388-391,445-449,487-489,503-505,520-522,532-535,544-551,592-595.试验成功构建阳性质粒pET-32a-H,表达目的蛋白,并成功预测出H蛋白潜在的抗原表位.为早日消除PPRV研制新型亚单位疫苗提供参考.