融合蛋白Trx-T4DL可溶性表达、纯化与其生物活性应用

• 作者: 付大伟 徐伟 陈启蒙
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: T4 DNA连接酶 融合标签 自诱导 磁珠法 纯化 低背景克隆载体 连接
• 年，卷（期）: 2018,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 83-89,96
• 页数: 8页
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2018.07.017

摘要

构建含SUMO、IF2、GST、NusA、MsyB、Trx和MBP融合标签的重组表达载体,转化到大肠杆菌E.coli Transetta(DE3)中进行自诱导(auto-induction,AI)表达,以提高T4 DNA连接酶(T4 DL)的表达产量.通过磁珠法检测融合蛋白的可溶性表达情况,10％ SDS-PAGE电泳结果显示,重组菌Transetta(DE3)(pNBEVII-T4 DL)诱导表达的可溶性融合蛋白Trx-T4 DL的产量最多,经诱导培养条件优化后,Trx-T4DL的可溶性大幅度提高,确定了最佳诱导条件为30℃、装瓶量50 mL/250 mL、接种量2‰、pH7 .分别用镍柱和MagNi磁珠纯化重组菌破碎后上清中的融合蛋白Trx-T4 DL,结果显示后者纯化效率更高,最终获得的融合蛋白浓度为1700.462 mg/L.与其他公司T4 DL活性进行比较,检测其酶活性约为500U/μL,并使其成功应用于低背景重组克隆载体构建中,为融合蛋白Trx-T4 DL的生产及应用提供理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐伟	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	45	205	8.0	12.0
2	付大伟	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	10	28	3.0	4.0
3	陈启蒙	哈尔滨商业大学食品科学与工程重点实验室	2	5	2.0	2.0