小鼠cofilin2蛋白的原核表达及纯化

• 作者: 刘钟颖 袁白银
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: cofilin2 原核表达 蛋白纯化 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 23-28
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2019.01.0005

摘要

[目的]构建小鼠cofilin2原核表达载体并纯化表达产物.[方法]以胚胎期小鼠心脏组织的cDNA为模板PCR扩增cofilin2基因,经酶切连接表达载体PGEX-4T-1后转化人大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及优化,利用SDS-PAGE凝胶电泳,考马斯亮蓝R-250进行染色,检测GST-cofilin2的表达情况.通过谷胱甘肽树脂(Glutathione Resin)亲和层析进行纯化,最后通过Western Blot进行验证.[结果] PCR成功扩增cofilin2基因,双酶切及测序结果表明pGEX-4T-1-cofilin2原核表达载体构建成功,SDS-PAGE鉴定表明,在22℃、200 μmol/L的IPTG能诱导出大量可溶性的GST-cofilin2蛋白,分子量为43 kDa.Western Blot验证得到纯化的GST-cofilin2.[结论]成功构建小鼠cofilin2原核表达载体,纯化得到的重组小鼠cofilin2蛋白可用于后续的生物学研究.