利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2-/-

• 作者: 冉多良 刘赛宝 孟庆文 李亚芳 王伟 王辉 陈洪岩
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Tpl2 CRISPR/Cas9 MDCK-Tpl2-/-细胞 细胞质控 禽流感病毒
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 46-54
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190106

摘要

Tpl2是调节Ⅰ型(IFNα/β)和Ⅱ型(IFNγ) IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要.为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI =0.1),测定12h、24h、48h、72h细胞培养上清的血凝滴度及72h TCID50滴度.结果:靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2-/-);其与亲本细胞生长速率无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12h、24h、48h、72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清的血凝效价提高了1.78 ～2.5倍.病毒接种后72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2.8倍.结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础.