短乳杆菌49蛋白提取及酶解条件优化

• 作者: 孙珍 徐久翔 郭斯宇 钱衍霓
• 来源期刊: 质谱学报
• 学科: 化学
• 关键词: 短乳杆菌 胞外蛋白 胞内蛋白 蛋白提取 酶解条件 正交实验 液相色谱-质谱(LC-MS)
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 质谱技术在蛋白质分析中的应用
• 页码范围: 325-334
• 页数: 10页
• 分类号: O657.63
• 字数: 6553字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7538/zpxb.2018.0135

摘要

为了最大程度上获取短乳杆菌49(Lactobacillus brevis 49)的蛋白质信息,分别优化了蛋白质的提取条件与酶解条件.用正交实验法考察细胞破碎方法、蛋白酶种类、酶解时间、酶添加量4个因素对L.brevis 49的胞内蛋白提取方法以及酶解方法的影响,以质谱中检测到的蛋白质数目为参考指标进行优化;同时对培养基氮源进行优化,并分别选用TCA沉淀法、冷丙酮沉淀法、平衡酚-丙酮法和超滤法提取发酵液中的胞外蛋白.结果 表明:L.brevis 49胞内蛋白最佳的提取破壁方法为超声破碎法,最佳水解酶为糜蛋白酶和胰蛋白酶共同作用,最佳的酶与蛋白质量比为1∶50,最佳酶解时间为12h,获得胞内蛋白数目527个.获得L.brevis 49胞外蛋白的最佳培养基为0.6％酵母浸粉做单一氮源的MRS培养基,最佳提取方法为三氯乙酸(TCA)法,可获得44个含信号肽蛋白.该方法有望为啤酒的安全检测提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙珍	大连工业大学生物工程学院	6	8	2.0	2.0
2	徐久翔	大连工业大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0
3	郭斯宇	大连工业大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0
4	钱衍霓	大连工业大学生物工程学院	1	0	0.0	0.0