禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 吉艳红 李郁 贾艳娥 郭浩然
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽腺病毒4型(FAdV-4) Fiber2蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1804-1812
• 页数: 9页
• 分类号: S855.3
• 字数: 6451字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.10.010

摘要

自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势.为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入pCold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2.pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PG-Tf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropy1 β-D-thiogalac toside,IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体.Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay,IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性.建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96％,特异性为100％.本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李郁	安徽农业大学动物科技学院	140	887	14.0	23.0