莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: 刘思佳 刘雁霞 樊振川 王岩 王慧 黄梦倩
• 来源期刊: 天津科技大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 莱茵衣藻 Bardet-Biedlsyndrome-1(BBS1) 载体构建 原核表达 抗原 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 食品与生物技术
• 页码范围: 31-34,47
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3659字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13364/j.issn.1672-6510.20180196

摘要

Bardet-Biedl syndrome-1(BBS1)是一种与纤毛信号传导相关的蛋白,关于其如何在信号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚.莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)是研究纤毛信号传导的模式生物,因此制备莱茵衣藻BBS1蛋白多克隆抗体对阐明其作用机理意义重大.采用RT-PCR技术从C.reinhardtiiCC-125中提取总RNA,扩增1731 bp的目的基因bbs1,插入到pET-28a(+)原核表达载体,成功构建pET-28a(+)-bbs1重组质粒,转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)经IPTG诱导后成功表达6×His-BBS1融合蛋白,融合蛋白经亲和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA法测得抗血清效价达到1:102400,经免疫印迹实验(Western blot)对C.reinhardtii CC-125检测具有较高特异性.实现了莱茵衣藻BBS1蛋白的原核表达,制备出一支兔抗莱茵衣藻BBS1蛋白的多克隆抗体,为研究BBS1蛋白在莱茵衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础.