烟草NtTkr尾部T1084缺失和替换突变原核表达载体的构建及诱导表达

• 作者: 乔慧聪 徐林娜 李芬 童文艳 胡孟可
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 NtTkR 缺失和替换突变 载体构建 诱导表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·生物技术
• 页码范围: 38-42
• 页数: 5页
• 分类号: S188.2|Q291
• 字数: 3376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.201751346

摘要

已知烟草驱动家族新成员NtTkr尾部第3个卷曲螺旋(Coiled-coil,CC3)第1084位苏氨酸(T1084)对靶蛋白的结合至关重要,通过对NtTkr尾部的酵母双杂交筛选得到多个与Ntkr互作的候选蛋白.为确定T1084缺失(T1084d)或替换(T1084A)突变对NtTkr与这些候选蛋白体外互作的重要性,首先以pBI121-NtTkr为模板,通过重叠延伸PCR扩增得到烟草NtTkr尾部T1084d、T1084A片段并将其克隆入质粒pUC19,经蓝白斑筛选、SmaⅠ-BamHⅠ双酶切鉴定后送去测序,获得正确的T1084缺失和替换的NtTkr尾部;然后将重组的pUC19-T1084d、pUC19-T1084A与pMXB10进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切,回收目的片段和载体片段并连接,连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选得到重组子,进行NotⅠ-NdeⅠ双酶切鉴定,最终成功构建pMXB10-NtTkr-T1084A和pMXB10-NtTkr-T1084d原核表达载体;最后将原核表达载体pMXB10-T1084d和pMXB10-T1084A转入BL21(DE3)中,分别经0.05,0.06 mmol/L IPTG浓度诱导,12％SDS-PAGE电泳检测蛋白质表达情况,结果证明获得了NtTkr-T1084d-1317和NtTkr-T1084A-1320的成功表达,且IPTG浓度大于0.06 mmol/L时,均可高效表达约77 ku的NtTkr-T1084A-1320和76.2 ku的NtTkr-T1084d-1317蛋白量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李芬	河南师范大学生命科学学院	35	84	5.0	7.0
2	徐林娜	河南师范大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
3	胡孟可	河南师范大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0
4	童文艳	河南师范大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
5	乔慧聪	河南师范大学生命科学学院	2	1	1.0	1.0