Dectin-1慢病毒过表达载体的构建与鉴定

• 作者: 刘栋华 徐红艳 沈林霞
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒 Dectin-1 真菌
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 507-512
• 页数: 6页
• 分类号: R756.6|Q782
• 语种: 中文
• DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201811065

摘要

目的 通过构建Dectin-1慢病毒过表达载体,感染巨噬细胞RAW264.7,建立Dectin-1过表达的巨噬细胞模型.方法 根据小鼠Dectin-1基因序列设计引物,经PCR扩增目的基因后克隆至载体pLenti6.3-IRES2-EGFP/V5 DEST(MCS),获得重组质粒pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGF.经和包装质粒Mix共同转染293T细胞,收获慢病毒,利用293T细胞大量扩增慢病毒并进行慢病毒的滴度测定,根据MOI值感染巨噬细胞RAW264.7,经荧光显微镜和荧光定量PCR鉴定感染慢病毒组和感染空病毒组中Dectin-1基因的表达.结果 PCR和测序结果证明已成功构建pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGFP,成功包装慢病毒,计算慢病毒滴度为3.12×109Tu/mL,成功感染巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜下可见绿色荧光,RT-PCR检测到感染重组慢病毒组Dectin-1表达量是感染空病毒组的1 275倍(P＜0.01).结论 成功构建Dectin-1基因过表达的巨噬细胞模型,为进一步研究Dectin-1基因在巨噬细胞对抗真菌感染中的作用打下基础.