山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化

• 作者: 刘海峰 张宇 袁赫海 陈蒙
• 来源期刊: 安徽农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 山葡萄 PAL基因 正交设计 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 园艺
• 页码范围: 888-893
• 页数: 6页
• 分类号: S663.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13610/j.cnki.1672-352x.20191122.023

摘要

山葡萄苯丙胺酸解氨酶(PAL)是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径.构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到pMD 18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化.结果 显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显著(P＜0.05),诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间.IPTG诱导浓度对其影响最显著(P=0.015＜0.05),且IPTG浓度为0.6 mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳.成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘海峰	延边大学农学院	34	114	5.0	9.0
2	张宇	延边大学农学院	12	39	4.0	6.0
3	陈蒙	延边大学农学院	9	10	2.0	3.0
4	袁赫海	延边大学农学院	2	4	1.0	2.0