猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 周芝海 曾繁文 谭耀荣 郑瑶瑶 马静云 麦凯杰
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪急性腹泻综合征冠状病毒 N蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1179-1186
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0148

摘要

为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS1-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析.随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体.结果 表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱导表达出可溶性重组蛋白SADS-CoV-N,分子质量约为67 ku,最佳诱导时间为6h.Western-blot以及间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体能特异性检测SADS-CoV,证明重组蛋白有良好的免疫原性.本研究为后续建立SADS-CoV快速诊断方法及该病毒致病机制的深入研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马静云		87	548	13.0	19.0
2	麦凯杰		4	3	1.0	1.0
3	曾繁文		3	0	0.0	0.0
4	周芝海		2	0	0.0	0.0
5	谭耀荣		1	0	0.0	0.0
6	郑瑶瑶		2	0	0.0	0.0