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摘要:
目的:构建CUL5基因3'-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-148a-3p与CUL5的靶向关系.方法:利用生物信息学软件预测miR-148a-3p与CUL5结合位点;利用PCR扩增CUL5基因3'-UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-ReportTM双荧光素酶报告基因载体中,同时构建CUL53'UTR突变载体;将miR-148a-3p及阴性对照分别与野生型has-CUL5-wt 3'-UTR及突变型has-CUL5-mut 3'-UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果:Targetscan、PicTar、miRanda、PITA、miRDB数据库预测结果显示,miR-148a-3p与CUL5基因3'UTR存在互补结合位点.酶切及测序结果表明,双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性实验表明,miR-148a-3p mimics能够与CUL5基因3′UTR结合并抑制荧光素酶活性;对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光活性有所上升.结论:miR-148a-3p能够与CUL5靶向性结合,CUL5是miR-148a-3p新的靶基因.
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文献信息
篇名 CUL53'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与MiR-148a-3p靶向验证
来源期刊 湖南师范大学学报(医学版) 学科 医学
关键词 CUL5 3'UTR 双荧光素酶报告载体 miR-148a-3p
年,卷(期) 2019,(1) 所属期刊栏目 基础医学
研究方向 页码范围 4-7
页数 4页 分类号 R739.41
字数 3095字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1673-016X.2019.01.002
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 彭小宁 湖南师范大学医学院 28 100 5.0 9.0
2 张珊 湖南师范大学医学院 5 4 1.0 2.0
3 罗艳红 湖南师范大学医学院 3 0 0.0 0.0
4 李南 湖南师范大学医学院 5 11 1.0 3.0
5 杨博 湖南师范大学医学院 2 8 1.0 2.0
6 周钰皓 湖南师范大学医学院 1 0 0.0 0.0
7 滕雄 湖南师范大学医学院 1 0 0.0 0.0
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CUL5
3'UTR
双荧光素酶报告载体
miR-148a-3p
研究起点
研究来源
研究分支
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湖南师范大学学报(医学版)
双月刊
1673-016X
43-1449/R
大16开
湖南省长沙市岳麓区咸嘉湖,《湖南师范大学学报(医学版)》编辑部
2004
chi
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