CUL53'-UTR双荧光素酶报告载体构建及与MiR-148a-3p靶向验证

• 作者: 周钰皓 张珊 彭小宁 李南 杨博 滕雄 罗艳红
• 来源期刊: 湖南师范大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CUL5 3'UTR 双荧光素酶报告载体 miR-148a-3p
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R739.41
• 字数: 3095字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-016X.2019.01.002

摘要

目的:构建CUL5基因3'-UTR双荧光素酶报告载体,并验证miR-148a-3p与CUL5的靶向关系.方法:利用生物信息学软件预测miR-148a-3p与CUL5结合位点;利用PCR扩增CUL5基因3'-UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-ReportTM双荧光素酶报告基因载体中,同时构建CUL53'UTR突变载体;将miR-148a-3p及阴性对照分别与野生型has-CUL5-wt 3'-UTR及突变型has-CUL5-mut 3'-UTR双荧光素酶报告质粒共转染至293T细胞中,双荧光素酶报告系统检测各组荧光素酶活性.结果:Targetscan、PicTar、miRanda、PITA、miRDB数据库预测结果显示,miR-148a-3p与CUL5基因3'UTR存在互补结合位点.酶切及测序结果表明,双荧光素酶报告载体构建成功;荧光素酶活性实验表明,miR-148a-3p mimics能够与CUL5基因3′UTR结合并抑制荧光素酶活性;对其预测靶位点进行突变后,突变型载体中的报告荧光活性有所上升.结论:miR-148a-3p能够与CUL5靶向性结合,CUL5是miR-148a-3p新的靶基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭小宁	湖南师范大学医学院	28	100	5.0	9.0
2	张珊	湖南师范大学医学院	5	4	1.0	2.0
3	罗艳红	湖南师范大学医学院	3	0	0.0	0.0
4	李南	湖南师范大学医学院	5	11	1.0	3.0
5	杨博	湖南师范大学医学院	2	8	1.0	2.0
6	周钰皓	湖南师范大学医学院	1	0	0.0	0.0
7	滕雄	湖南师范大学医学院	1	0	0.0	0.0