猪NLRP3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 刘海隆 张艳 曹宗喜 王文秀 谭树义
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 NLRP3蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1075-1079
• 页数: 5页
• 分类号: S852.42
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.06

摘要

为了获得猪源NLRP3重组蛋白以及针对猪NLRP3蛋白的多克隆抗体,本试验采用原核表达技术对猪源NL-RP3蛋白的主要抗原区域进行了截短表达与鉴定,并以重组蛋白为免疫原免疫兔制备兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体.结果 显示,经RT-PCR方法扩增到大小为864 bp的NLRP3蛋白的主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-32α原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导获得了大小为50 000的重组蛋白;重组蛋白经纯化后Western blot检测其可与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应;以纯化蛋白为免疫原制备的兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体的抗体效价达1∶25 600,Western blot检测其可与NLRP3重组蛋白发生特异性反应.结果 表明,获得了具有良好反应活性的NLRP3重组蛋白与多克隆抗体,为研究NLRP3蛋白的结构与功能、NLRP3蛋白与猪炎症性疾病的相互作用机制奠定了基础.