基于CRISPR/Cas9技术构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因的关系

• 作者: 夏丽 张倩文 柳刚 蔡锦 许乃寒
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: CRISPR/CAS9 CELF6 p53 细胞增殖 肿瘤抑制基因
• 年，卷（期）: 2019,（17）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3201-3207
• 页数: 7页
• 分类号: R-33|Q78|R730.231
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2019.17.001

摘要

目的:构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因之间的关系.方法:CRISPR/Cas9双载体慢病毒系统通过两个慢病毒载体分别向细胞中导入Cas9蛋白和sgRNA序列表达框,从而实现对CELF6基因的敲除.通过Surveyor(错配酶法)检测sgRNA活性并利用Western blot(蛋白质免疫印迹)检测CELF6的敲除效率.进一步利用CCK-8试剂盒检测敲除CELF6和过表达CELF6对细胞增殖的影响.利用公开可用的癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CELF6在多种肿瘤组织中的表达情况.结果:CELF6基因敲除的HCT116细胞系成功构建.Western blot检测发现CELF6基因敲除的细胞系中p53、p-RB蛋白的表达水平显著下调,而CELF6过表达的细胞中p53、p-RB蛋白的表达水平明显上调.CCK-8实验结果显示敲除CELF6基因后,细胞增殖活性显著增强;而过表达CELF6后,细胞的增殖活性受到明显抑制.生物信息学分析发现CELF6在结肠癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤组织中显著低表达.结论:推测CELF6是一种新的潜在肿瘤抑制基因,其可能在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许乃寒		3	3	1.0	1.0
2	柳刚		1	0	0.0	0.0
3	张倩文		1	0	0.0	0.0
4	夏丽		1	0	0.0	0.0
5	蔡锦		1	0	0.0	0.0