腺苷脱氨酶三种原核表达载体的构建及蛋白表达

• 作者: 吴新忠 庄俊华 张露 林海标 韩丽乔 黄宪章 黄小亭
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺苷脱氨酶 ADA 原核载体 pET-28b pET-32a pHSIE 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 281-284,289
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 4378字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2019.03.007

摘要

目的 利用分子克隆技术表达腺苷脱氨酶蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,再以其为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增腺苷脱氨酶基因,然后将目的基因连接到3种原核质粒pET-28b、pET-32a(+)和pHSIE中,再将测序完全正确的克隆质粒用CaCl2法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达,并筛选最优表达条件,经Western-blot和SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况.结果 3种质粒载体携带的目的基因DNA测序结果证实其很好地连接入载体质粒,表达的ADA蛋白经Western-blot和SDSPAGE鉴定符合,最优表达条件为诱导剂IPTG浓度0.4mmol/L,表达温度为16℃,表达时间为24h.结论该实验成功构建了腺苷脱氨酶的3个原核载体(BL21+pET-28b+ADA,BL21+pET-32a+ADA,BL21+pHSIE+ADA),且3个载体均成功高效表达了腺苷脱氨酶蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宪章		31	157	6.0	11.0
2	庄俊华		26	177	8.0	12.0
3	韩丽乔		8	25	2.0	5.0
4	林海标		8	8	2.0	2.0
5	黄小亭		4	4	1.0	2.0
6	张露		2	0	0.0	0.0
7	吴新忠		2	8	1.0	2.0