塞尼卡病毒VP1与VP3蛋白原核表达及蛋白纯化

• 作者: 南福龙 哈卓 孙文超 庄忻雨 张赫 张金勇 肖朋朋 解长占 许汪 金宁一 韩继成 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 塞尼卡病毒 VP1 VP3 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 463-468,475
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.03.04

摘要

利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV) VP1与VP3蛋白,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化研究.扩增SVV VP1与VP3目的基因,并分别将VP1、VP3克隆至pET32a(+)载体,构建pET32a-VP1与pET32a-VP3重组质粒,将两者分别转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达.优化蛋白表达条件,利用His标签镍离子蛋白纯化拄纯化蛋白.RT-PCR结果显示可扩增出792 bp SVV VP1与717 bp VP3目的片段,将VP1与VP3目的基因成功克隆至pET32a(+)载体,分别转化至BL21(DE3),成功地表达50 000 pET32a-VP1重组蛋白以及48 000 pET32a-VP3重组蛋白;pET32a-VP1及pET32a-VP3重组蛋白均在条件为37℃、0.6 mmol/L诱导剂诱导5h表达量最高,重组蛋白均以包涵体的形式进行表达并且可纯化出目的蛋白.结果 表明,本试验成功地利用原核表达系统表达并纯化SVV VP1与VP3重组蛋白,为制备单克隆与多克隆抗体、检测试剂盒研发以及新型疫苗的研发奠定了基础.