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pCDH-NLRX1慢病毒质粒的构建及NLRX1在A549细胞中稳定表达
pCDH-NLRX1慢病毒质粒的构建及NLRX1在A549细胞中稳定表达
作者:
冯禹楠
刘蓉蓉
吴兴安
应旗康
张晓晓
王芳
董宇航
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
固有免疫
模式识别受体
NLR蛋白
摘要:
目的 构建核苷酸结合寡聚结构域样受体家族成员X1(NLRX1)慢病毒质粒以及能够稳定过表达NLRX1的细胞系.方法 利用分子克隆方法从pCMV3-NLRX1质粒中克隆出NLRX1 cDNA全长片段,将全长的NLRX1片段插入pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro中得到过表达慢病毒质粒pCDH-NLRX1;将pCDH-NLRX1与包装质粒pMD2和pAX2共转染HEK293T细胞后包装、浓缩得到慢病毒颗粒并感染A549细胞,进而利用嘌呤霉素对感染后的A549细胞进行筛选得到稳定过表达NLRX1的A549细胞系.利用实时定量PCR检测感染A549细胞中NLRX1的mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平,免疫荧光细胞化学法检测NLRX1的表达.结果 成功构建pCDH-NLRX1质粒,pCDH-NLRX1与包装质粒共转染HEK293T细胞后,得到滴度约1×105转导单位(TU)/mL的慢病毒颗粒;包装成熟的pCDH-NLRX1慢病毒颗粒感染A549细胞后,利用嘌呤霉素对A549细胞进行筛选,得到NLRX1过表达稳转细胞系.感染的A549细胞中NLRX1表达明显,其mRNA水平和蛋白含量明显增加.结论 成功构建了过表达NLRX1的慢病毒质粒并建立了NLRX1过表达的稳定感染细胞系.
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文献信息
篇名
pCDH-NLRX1慢病毒质粒的构建及NLRX1在A549细胞中稳定表达
来源期刊
细胞与分子免疫学杂志
学科
医学
关键词
固有免疫
模式识别受体
NLR蛋白
年,卷(期)
2020,(2)
所属期刊栏目
基础研究
研究方向
页码范围
152-156
页数
5页
分类号
Q78|Q279|R392|R392-33
字数
语种
中文
DOI
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固有免疫
模式识别受体
NLR蛋白
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研究来源
研究分支
研究去脉
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相关学者/机构
期刊影响力
细胞与分子免疫学杂志
主办单位:
陕西省免疫学会
中国免疫学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1007-8738
CN:
61-1304/R
开本:
大16开
出版地:
西安市长乐西路169号
邮发代号:
52-184
创刊时间:
1985
语种:
chi
出版文献量(篇)
7013
总下载数(次)
22
总被引数(次)
39763
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
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