人Nek2蛋白原核表达纯化及其多克隆抗体制备

• 作者: 何敏 李刚 李辉 杨丽超 温莎 陈秋利
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Nek2 原核表达 多克隆抗体 KCl染色
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 31-37
• 页数: 7页
• 分类号: Q816
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.1908061

摘要

目的:通过原核表达系统表达人Nek2蛋白,优化表达条件并纯化Nek2蛋白,制备抗Nek2多克隆抗体.方法:将Nek2基因片段构建到原核表达载体pET30a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3);加入诱导剂IPTG诱导表达,对诱导温度、诱导剂IPTG终浓度、诱导时间等条件进行优化:利用12％ SDS-PAGE后250mmol/L KCl染色切胶纯化蛋白质,将纯化后的Nek2蛋白进行质谱鉴定;纯化Nek2蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,运用ELISA、Western blot和免疫荧光实验检测多克隆抗体效价和特异性.结果:构建了pET30a(+)-Nek2重组原核表达质粒,诱导的重组人Nek2蛋白主要以包涵体的形式存在;蛋白质的最适诱导表达条件为28℃,180r/min条件下加入终浓度为0.2mmol/L IPTG诱导32h;质谱分析纯化后的蛋白质为Nek2蛋白,最终获得浓度为1.35mg/ml纯化后的Nek2蛋白;纯化蛋白免疫小鼠,多克隆抗体效价大于1∶243 000,且具有良好的抗原特异性;免疫荧光实验显示Nek2主要定位于细胞质和细胞核.结论:利用重组人Nek2蛋白获得具有良好抗原特异性的抗Nek2多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何敏	广西医科大学公共卫生学院	115	586	12.0	17.0
5	李刚	广西医科大学公共卫生学院	28	115	8.0	10.0
6	李辉	广西医科大学公共卫生学院	12	21	4.0	4.0
7	温莎	广西医科大学公共卫生学院	5	1	1.0	1.0
8	陈秋利	广西医科大学公共卫生学院	2	0	0.0	0.0
9	杨丽超	广西医科大学公共卫生学院	2	0	0.0	0.0