猪SIgA分泌片的表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 丁壮 朱利塞 李菲 王娟 王贵平 贾爱卿 邓胜朝 钱雪桥
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: SIgA 分泌片 多克隆抗体 黏膜免疫
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 68-72
• 页数: 5页
• 分类号: S852.42
• 字数: 2313字
• 语种: 中文

摘要

SIgA是评价黏膜免疫的重要指标,分泌片(SC)是SIgA的特有成分,为了更方便的获得大量的SIgA的分泌片,本研究应用RT-PCR方法扩增出SC基因片段,将SC基因片段克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,经酶切和测序验证获得pGEX-4T-1-SC重组质粒;将获得的pGEX-4T-1-SC转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导表达重组蛋白rSC.重组蛋白rSC经鉴定和纯化后,按常规免疫程序制备多克隆抗体;利用Western blot对抗重组蛋白rSC的多克隆抗体进行鉴定.结果显示,该抗体能特异性识别猪初乳中的SIgA免疫球蛋白,而与猪初乳中的IgG不发生反应.因此,抗SC重组蛋白的多克隆抗体可以作为抗SIgA免疫球蛋白的特异性抗体,为进一步建立SIgA的检测方法及黏膜免疫的研究奠定基础.