慢病毒介导稳定表达禽β-防御素9的 DF-1细胞系的建立及初步应用

• 作者: 宋祥军 李芳果 殷冬冬 涂健 熊修琦 祁克宗 耿姝 薛媚 邵颖
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 禽β-防御素9 DF-1细胞 稳定表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2020,（3）
• 所属期刊栏目: 动物水产科学
• 页码范围: 530-536
• 页数: 7页
• 分类号: S858.2
• 字数: 4214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2020061

摘要

[目的]为建立能够稳定表达禽β-防御素9(AvBD9)的DF-1细胞系,并检测其表达产物对耐药大肠杆菌的抗菌活性.[方法]将AvBD9基因克隆至慢病毒载体pLOV-eGFP中,将重组质粒与psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞,包装成含AvBD9基因的重组慢病毒,并将其感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素筛选和纯化,获得稳定表达AvBD9蛋白的DF-1细胞系.利用RT-PCR和Western blot验证AvBD9基因在DF-1中的转录和表达;将细胞培养上清液与耐药大肠杆菌混合培养,检测其抗菌效果,并用扫描电镜观察其对菌体的损伤情况.[结果]筛选出了稳定表达AvBD9的DF-1细胞系,且AvBD9在转录水平和蛋白水平均有表达;细胞培养上清使耐药大肠杆菌的存活率低于55％,电镜观察显示菌体皱缩,损伤严重.[结论]成功建立能够稳定表达AvBD9的DF-1细胞系,为抗生素替代品的生产制备提供了借鉴思路,为进一步开展AvBD9的抗菌研究提供依据.