LbCpf1基因的原核表达、纯化与体外切割检测

• 作者: 吕一凡 吕国梁 时邵辉 李更东 王春生 薛楠
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: LbCpf1蛋白 原核表达 镍柱纯化 体外切割检测
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 41-48
• 页数: 8页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.2003057

摘要

目的:为获得具有体外切割活性的LbCpf1蛋白.方法:将毛螺菌科细菌ND2006(Lachnospiraceae bacterium ND2006)的LbCpf1基因编码区连接至pHis*6(IV),构建原核表达质粒CRISPR-LbCpf1-6*His.将该重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导目的蛋白表达,经镍柱亲和层析纯化、透析除盐和凝胶电泳检测等步骤获得重组蛋白,进行体外切割试验鉴定重组蛋白切割活性.结果:双酶切鉴定和测序结果表明成功构建重组质粒CRISPR-LbCpf1-6*His,经转化后获得含有重组质粒CRISPR-LbCpf1-6*His的BL21(DE3)蛋白表达菌株.将菌株接种于37℃,160 r/min,IPTG终浓度为0.5 mmol/L的条件下诱导5h,最终镍柱纯化除盐后的LbCpf1蛋白终浓度可达400 ng/μl,在体外适宜条件下,该重组蛋白可与成熟的crRNA结合切断标靶DNA.结论:获得的高纯度LbCpf1蛋白具有体外切割活性,可用于后续基因编辑研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王春生	东北林业大学生命科学学院	61	134	7.0	9.0
2	吕一凡	东北林业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
3	李更东	东北林业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
4	薛楠	东北林业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
5	吕国梁	东北林业大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
6	时邵辉	东北林业大学生命科学学院	2	0	0.0	0.0