重组泛素样特异性蛋白酶1在大肠杆菌中的表达条件优化与分离纯化

• 作者: 张叶明 付正豪 陈云雨
• 来源期刊: 锦州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素样特异性蛋白酶1 原核表达 表达优化 亲和层析
• 年，卷（期）: 2020,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1-4,30
• 页数: 5页
• 分类号: R33
• 语种: 中文

摘要

目的 确定重组泛素样特异性蛋白酶1(ubiquitin-like specific protease 1,Ulp1)在大肠杆菌中的最佳表达条件并进行分离纯化.方法 采用DNA重组技术,构建重组质粒Ulp1-pET-28a,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)细胞中,以IPTG诱导Ulp1原核表达,并从诱导时间、诱导温度和IPTG诱导浓度方面确定其最佳表达条件,再以亲和层析法分离纯化Ulp1.结果 SDS-PAGE分析表明,工程菌诱导温度为30℃、诱导时间为6 h、IPTG浓度为0.2 mmol/L时Ulp1表达量最高,表达量约为350 mg/L且成功进行了Ulp1的分离纯化.结论 本研究成功进行了Ulp1原核表达条件的优化与分离纯化,为Ulp1在生物工程中的酶切应用奠定了实验基础.