从江香猪lncGHR1基因的克隆、组织表达及超表达研究

• 作者: 吴小敏 吴巧群 崔小芝 朱晓锋 许厚强 谌颖莲 谢玲玲 赵佳福 陈伟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 从江香猪 生长激素受体(GHR) 长链非编码RNAs (lncRNAs) 差异表达
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 2165-2175
• 页数: 11页
• 分类号: S828
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2020.12.007

摘要

生长激素受体(growth hormone receptor,GHR)在动物生长发育过程中具有重要作用.为研究GHR基因相关长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)在从江香猪(Sus scrofa)不同组织中的表达规律,本研究以贵州从江香猪和大白猪为研究对象,以生长发育相关的miR-146b-3p为关联点,通过SWChen 2.3程序筛选GHR相关lncRNAs,对筛选出来的lncRNAs进行克隆验证.以候选lncRNA NONSUST017828.1(GenBank No.TCONS_00020564,命名为lncGHR1)为研究对象,对其进行生物信息学及组织表达谱分析,并构建lncGHR1-CMV超表达载体,转染至人源胚胎肾细胞(human embryonic kidney cells,HEK-293T)和从江香猪原代肌细胞,检测细胞增殖相关基因YAP(Yes-associated protein)和TAZ(transcription activator)的表达情况.结果显示,lncGHR1二级结构最小自由能为-131.20 kcal/mol,含3个ORF;局部比对结果发现,lncGHR1与猪GHR 3'UTR相似程度最高;lncGHR1与miRNA结合的抑制系数为4.96％,其中miR-146-3p与lncGHR1亲和评分最高.lncGHR1在从江香猪脾脏和肺脏中表达量最高,心脏中最低;在大白猪肝脏中表达量最高,心脏中最低;lncGHR1在从江香猪脾脏、肺脏、背最长肌和小肠中的表达量均极显著高于大白猪(P<0.01),但肝脏中的表达量极显著低于大白猪(P<0.01),其他组织表达差异不显著.lncGHR1在HEK-293T细胞和从江香猪原代肌细胞中的超表达,显著提高TAZ基因的表达(P<0.05),但对YAP影响不大(P>0.05).以上结果表明lncGHR1在生长发育过程中发挥了重要作用,对解析从江香猪生长缓慢、个体矮小的成因机制及猪的遗传改良育种具有重要意义.