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Bt-Cry5Aa杀虫基因的原核表达、纯化及其在棉花中的鉴定
Bt-Cry5Aa杀虫基因的原核表达、纯化及其在棉花中的鉴定
作者:
周仲华
张秋平
王峰
贺文
赵世浩
陈金湘
马肖
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
苏云金芽胞杆菌(Bt)
Cry5Aa基因
原核表达
蛋白纯化
表达鉴定
摘要:
单一转苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因Cry1Ab/Cry1Ac抗虫棉(Gossypium)作为我国生产上大面积种植作物,随着种植时间及面积的增加导致害虫对Bt毒蛋白的抗性增强迫使新型Bt基因研究工作成为解决问题的关键.Cry5Aa是一种具有兼抗鳞翅目和线虫的新型Bt杀虫基因,由湖南农业大学棉花研究所成功转入棉花,并获得稳定遗传的'JX0010'、'JX0020'品系,本研究构建了Cry5Aa全长基因原核表达载体,优化了原核表达诱导条件,并且对其在转Bt-Cry5Aa基因棉花品系中的表达进行了鉴定.结果表明,在37℃220 r/min 1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)条件下诱导4 h,其蛋白表达量最高.通过Western blot分析,发现蛋白分子量为79 kD,与理论值一致;同时,该蛋白以包涵体形式存在,通过谷胱甘肽-Sepharose4B小颗粒亲和层析纯化,蛋白纯度可达95%以上;转Bt-Cry5Aa基因棉花品系的鉴定实验表明:Cry5Aa基因能在转基因品系'JX0010'、'JX0020'中表达杀虫毒蛋白,且'JX0010'的Cry5Aa毒蛋白表达量在棉花不同时期及不同部位均高于'JX0020',且在生长期以蕾期为最高表达,植株部位上以叶片为最高表达.本研究构建了Bt-Cry5Aa杀虫基因的原核表达载体,获得了Cry5Aa的纯化蛋白,初步对其在棉花中的表达进行了鉴定,为对Bt-Cry5Aa杀虫基因的抗虫性、安全性等转基因检测及进一步在棉花中的应用提供了理论基础.
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cry1Ea12基因
cry2Aa16基因
生物活性
内容分析
文献信息
引文网络
相关学者/机构
相关基金
期刊文献
内容分析
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文献信息
篇名
Bt-Cry5Aa杀虫基因的原核表达、纯化及其在棉花中的鉴定
来源期刊
农业生物技术学报
学科
农学
关键词
苏云金芽胞杆菌(Bt)
Cry5Aa基因
原核表达
蛋白纯化
表达鉴定
年,卷(期)
2020,(9)
所属期刊栏目
研究论文与报告
研究方向
页码范围
1567-1575
页数
9页
分类号
S562|Q789
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1674-7968.2020.09.005
五维指标
作者信息
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姓名
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陈金湘
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赵世浩
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王峰
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周仲华
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张秋平
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Cry5Aa基因
原核表达
蛋白纯化
表达鉴定
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
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相关学者/机构
期刊影响力
农业生物技术学报
主办单位:
中国农业大学
中国农业生物技术学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1674-7968
CN:
11-3342/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室
邮发代号:
2-367
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
4211
总下载数(次)
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