靶向人巨细胞病毒UL145基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建

• 作者: 伍苑宾 胡兢晶 王波 苏海浩 谭琪琪
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人巨细胞病毒 UL145 CRISPR/Cas9 基因敲除
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 10-12,17,封3
• 页数: 5页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

目的 构建靶向人巨细胞病毒UL145基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒.方法 根据CRISPR/Cas9设计原则,设计3条靶向UL145基因的gRNA,构建重组lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,转化并挑选阳性克隆,进行PCR及测序验证.同时通过荧光素酶SSA(Luciferase SSA)检测CRISPR/Cas9活性,筛选出载体活性最佳质粒.结果 设计了3条靶向gRNA并构建lenti CRISPR-UL145-T1、T2、T3表达质粒,经PCR及测序鉴定载体构建成功;通过Luciferase SSA 检测,结果显示,lenti CRISPR-UL145-T3载体活性最强,明显高于lenti CRISPR-UL145-T1、T2载体活性.结论 重组质粒lenti CRISPR-UL145-T3筛选为活性最佳质粒,为进一步进行体内外敲除人巨细胞病毒UL145基因及其功能奠定基础.