鸭源NF-kB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用

• 作者: 张飘 贺欣薇 杨霞 曾茂芹 刘妍罕 张扬子 杨颖 温贵兰 程振涛 文明
• 来源期刊: 浙江农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸭 NF-kB1基因 荧光定量PCR 建立 应用
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 215-222
• 页数: 8页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-1524.2021.02.04

摘要

为建立鸭NF-kB1(nuclear factor-kappa B,NF-kB)基因的荧光定量PCR检测方法,并以建立的方法检测鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblasts,DEF)在感染鸭肠炎病毒(DEV)后NF-kB1基因随时间变化转录表达量的变化情况.根据GenBank上NF-kB1基因保守序列设计特异性引物,以鸭胚成纤维细胞mRNA提取样本反转录为cDNA,进行NF-kB1基因克隆质粒构建,以此为模板建立鸭NF-kB1基因荧光定量PCR检测方法并进行特异性、重复性和敏感性试验,并利用建立的方法DEF感染DEV后NF-kB1基因随时间变化的转录变化进行检测.结果显示:建立的鸭NF-kB1基因荧光定量PCR方法标准曲线呈现典型的S型,方程为y=-3.12x+44.086(R2=1),扩增效率为109.2％;其熔解温度Tm值为(83.5 ±0)℃,曲线呈特异性单峰,批内变异系数小于0.3％,批间变异系数小于0.2％;检测灵敏度可达到1.79个拷贝.DEF细胞在感染DEV后NF-kB1基因随时间改变转录水平变化无规律,但整体表达水平高于正常细胞,差异显著(P ＜0.05),36～84 h NF-kB1基因的转录水平与正常细胞中差异极显著(P ＜0.01).本研究成功建立了鸭NF-kB1基因荧光定量PCR检测方法,并对DEF细胞感染DEV后NF-kB1基因的转录水平进行了研究,为后续实验研究提供了技术和数据支撑.