帕利亚姆病毒VP7蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 李占鸿 宋子昂 杨振兴 肖雷 李卓然 谢佳芮 李华春 杨恒
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 帕利亚姆病毒 VP7蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 176-183
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0035

摘要

本研究将帕利亚姆病毒(PALV)VP7蛋白的编码区序列插入原核表达质粒pET-32a(+),构建出重组质粒pET32-PALV-VP7,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行重组蛋白的诱导表达.采用镍离子亲和层析进行重组蛋白的纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,采用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定.将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA、Western-blot与间接免疫荧光对多克隆抗体的效价与反应原性进行分析.结果显示,在37℃与0.1mmol/LIPTG诱导条件下,PALVVP7重组蛋白在大肠杆菌中得以高效表达,其分子质量约为43ku,以包涵体形式存在,占菌体蛋白总量的30.4％.重组蛋白经纯化与复性处理后纯度达94.1％,Western-blot结果显示,复性后的重组蛋白可与PALV阳性血清发生特异性结合.ELISA检测结果显示,制备的家兔抗PALVVP7多克隆抗体效价可达1:12 000.使用该多克隆抗体为一抗,可通过免疫荧光与Western-blot检测到PALV感染细胞中的VP7蛋白,表明抗体可特异性结合PALV的VP7蛋白.本研究成功在大肠杆菌中表达PALV VP7重组蛋白,并制备获得多克隆抗体,为PALV诊断试剂的开发奠定了基础.