小鼠Cdc25B突变型S15A荧光表达载体的构建及鉴定

• 作者: 冯少青 孟峻
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 关键词: 荧光表达载体 Cdc25B(S15A) HEK293细胞
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 695-699
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2021.06.006

摘要

目的 构建小鼠Cdc25B的突变型Cdc25B(S15A)的荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP,并观察其在真核细胞中的表达以验证载体是否构建成功.方法 利用PCR技术从质粒模板上扩增荧光表达的EGFP目的基因,将其与pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)载体连接,利用限制性内切酶XbaⅠ和BamHⅠ进行双酶切电泳后做测序鉴定,构建pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP荧光表达载体,利用脂质体法使其转染HEK293感受态细胞,通过Western blot法检测细胞内荧光质粒的表达.结果 荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP构建成功,将其转染至HEK293感受态细胞,于48 h后提取细胞蛋白,利用Western blot法检测到细胞内荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP成功表达,并且测序结果与预期一致.结论 成功构建了荧光表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B(S15A)-EGFP.