HSP27慢病毒载体的构建及其稳定表达细胞株的建立

• 作者: 马瑞仙 牛宇辉 吴贝 李向茸 许淑娟 李琼毅 柏家林 冯若飞
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 热休克蛋白27 慢病毒 稳定细胞株
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 105-112
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0006

摘要

热休克蛋白27(HSP27)是一种结构上高度保守的小分子热休克应激蛋白,它可通过与细胞自噬、细胞凋亡和天然免疫信号通路关键因子相互结合参与多种病毒的感染过程.为了便于深入研究HSP27在机体抗感染免疫中的作用,用PCR方法从A549细胞中扩增出HSP27片段,然后经双酶切、连接、转化等步骤获得HSP27的慢病毒表达载体pTRIP-HSP27,将此载体和另一对照载体pTRIP-EGFP分别转染至HEK-293T细胞中,48h后收集慢病毒将其转导至A549细胞,经嘌呤霉素筛选获得过表达HSP27的细胞株A549-HSP27和过表达EGFP的对照细胞株A549-EGFP.最后,经RT-qPCR、Western-blotting、IFA 和细胞活力检测等方法进行鉴定,获得了能稳定表达HSP27的细胞株.