Suv39h1基因RNA干扰慢病毒载体构建与验证

• 作者: 罗驰恒 沈艺琳 樊馨竹 何太平 高羽亭
• 来源期刊: 中国职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: Suv39h1 骨髓间充质干细胞 慢病毒载体 转染 构建 验证 大鼠
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Articles
• 页码范围: 495-501
• 页数: 7页
• 分类号: Q782|R114
• 语种: 中文
• DOI: 10.20001/j.issn.2095-2619.20211891

摘要

目的 构建色斑3-9抑制因子同源物1(Suv39h1)的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,通过转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)验证其干扰效果.方法 根据Suv39h1的基因序列和短发夹RNA序列设计原则,设计合成构建RNAi质粒的寡核苷酸,构建KD1、KD2、KD3 3种不同慢病毒敲低靶点的LV-Suv39h1-RNAi重组质粒.经酶切及测序正确后,将包装好的3种Suv39h1基因低表达慢病毒载体转染对数生长期的大鼠BMSCs,设为KD1、KD2、KD3转染组,并设转染阴性对照病毒的对照组.转染72 h后,鉴定转染效率,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测4组细胞中Suv39h1的mRNA相对表达水平.结果 测序结果表明成功构建3种LV-Suv39h1-RNAi重组质粒.慢病毒载体转染效率鉴定结果显示:当感染复数为20时,3种慢病毒载体转染后的BMSCs均有80.00％以上表达绿色荧光;表明慢病毒构建成功,且转染效率高.qPCR检测结果显示:KD1、KD2、KD3转染组BMSCs中Suv39h1 mRNA相对表达水平均低于对照组(P值均＜0.05),KD1和KD3转染组BMSCs中Suv39h1 mRNA相对表达水平均低于KD2转染组(P值均＜0.05);但KD1与KD3转染组BMSCs中Suv39h1mRNA相对表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建Suu39h1基因低表达慢病毒载体;该载体可在大鼠BMSCs中表达,为研究Suv39h1基因在急性髓系白血病中的作用奠定了基础.