RPL11基因稳定敲低细胞系的构建及验证

• 作者: 刘伟 郭佩东 贾楠楠 孙英杰 谭磊 刘炜玮 仇旭升 廖瑛 宋翠萍 丁铲 孟春春
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: RPL11 稳定敲低细胞系 新合成蛋白 细胞活力
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文|RESEARCH PAPERS
• 页码范围: 1241-1248
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2021.06.0014

摘要

针对RPL11基因设计三条不同的shRNA,并分别克隆至带绿色荧光标签的pRNAT-U6.1载体,以用于构建RPL11稳定敲减的细胞系.将重组质粒转染至HeLa细胞中并加入G418进行筛选,随后通过有限稀释法将阳性细胞亚克隆纯化.将扩大培养的亚克隆细胞进行Western blot和qPCR实验验证获得RPL11基因稳定敲低的细胞株.利用CCK-8细胞活力检测试剂盒和Puromycin标记法测定RPL11基因稳定敲低细胞系的生长活力和新生蛋白合成能力,结果表明,RPL11基因稳定敲低后并不影响细胞的活力和新生蛋白合成能力,该细胞系为后续研究RPL11的非核糖体功能奠定了基础.