猴源cathepsin基因shRNA文库及其稳定敲减细胞系的构建

• 作者: 刘姣扬 刘晓贺 巴根 杨国宇 王江 褚贝贝 郭珍珍 韩立强 韩莹倩 魏宇双
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: cathepsin shRNA Marc145 慢病毒 稳定敲减细胞系
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 基础兽医
• 页码范围: 1282-1290
• 页数: 9页
• 分类号: S852.23
• 字数: 4946字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.06.021

摘要

目前关于组织蛋白酶(cathepsin)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV)生活周期中发挥功能的研究较少.为了探究宿主细胞中cathepsin在PRRSV吸附、入侵、脱壳、生物合成、组装以及释放过程中的作用,选取源于 MA-104的非洲绿猴胚胎肾上皮细胞Marc145细胞系(对PRRSV易感);利用RNAi原理,构建了以pLKO.1为载体的cathepsin基因shRNA文库;并用puromycin筛选出稳定敲减cathepsin的细胞株.结果显示:本试验构建的cathepsin-shRNA文库包含45个克隆,涉及15种 cathep-sin基因,筛选出的稳定细胞株中相应 cathepsin基因mRNA的表达量均有显著下降.这些细胞株的构建为进一步研究cathepsin在PRRSV生活周期中发挥的重要功能奠定了基础.