辣椒脉黄病毒P4蛋白多克隆抗体制备与应用

• 作者: 卜姗 罗香文 张德咏 张松柏 张宇 刘勇
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 辣椒脉黄病毒 P4基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 植物保护|Plant Protection
• 页码范围: 74-78
• 页数: 5页
• 分类号: S436
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2022.01.010

摘要

[目的]辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,PeVYV)属马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus),生产上主要侵染辣椒,目前在我国呈现快速扩展态势,因此,亟需开展PeVYV致病性研究,为分析对辣椒的潜在威胁提供依据.以PeVYV编码运动蛋白P4为免疫源,制备多克隆抗体,建立PeVYV P4蛋白特异性检测方法,为PeVYV P4蛋白功能研究奠定基础.[方法]采用RT-PCR技术,从感染PeVYV辣椒cDNA中扩增获得片段大小为471 bp的PeVYV P4基因,并克隆到原核表达载体pDEST17,转化E.coli Rosetta中进行诱导表达,采用Ni-NTA柱层析纯化.以纯化P4蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.制备的多克隆抗体采用Western blotting检测.[结果]原核表达的PeVYV P4蛋白,SDS-PAGE表明纯化蛋白为一分子量约为25 kDa的单一条带.Western blotting检测表明,制备的多克隆抗体,特异性的结合P4蛋白.PeVYV侵染辣椒样本检测表明,制备的P4多克隆抗体能特异性检测PeVYV.[结论]制备的PeVYV P4多克隆抗体,可用于特异性检测PeVYV P4蛋白,为进一步深入研究P4蛋白的功能奠定基础.