方格星虫实时荧光定量PCR内参基因的选择与验证

• 作者: 彭冰冰 宾东超 周于娜 杨志会 蔡小辉 彭银辉
• 来源期刊: 水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 方格星虫 实时荧光定量PCR 内参基因
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与应用|Research and Application
• 页码范围: 304-310
• 页数: 7页
• 分类号: S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16378/j.cnki.1003-1111.20098

摘要

目前研究基因定量表达的方法主要为实时荧光定量PCR,选择合适的内参基因可以提高实时荧光定量PCR分析的准确性.选取方格星虫的体壁肌肉、吻、肾管、脑、肠道、收吻肌、食道、血淋巴细胞为材料,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析EF1-α2、α-Tub1、RPL13-b、Actin1、H3-b、GAPDH1共6个候选内参基因的表达稳定情况,并以方格星虫的免疫球蛋白组织分布情况对内参基因的稳定性进行验证.结果显示,通过BestKeeper软件计算候选内参基因稳定性顺序为:RPL13-b>H3-b>EF1-α2>GAPDH1>Actin1>α-Tub1;Normfider软件分析候选内参基因稳定性顺序为:RPL13-b>EF1-α2>GAPDH1>H3-b1>Actin1>α-Tub1;geNorm软件分析候选内参基因稳定性顺序为:RPL13-b=H3-b>EF1-α2>GAPDH1>Actin1>α-Tub1.采用最稳定和最不稳定内参基因对免疫球蛋白基因在不同组织的表达水平变化进行校准时发现,其表达谱呈现不同模式.RPL13-b内参基因在方格星虫全组织中的表达最稳定,可作为最适单内参基因.