稳定表达hACE2的293T细胞系的建立及功能分析

• 作者: 黄楠 郎巧利 李莉萍 杨希 刘春麟
• 来源期刊: 中国细胞生物学学报
• 关键词: hACE2 稳定转染 293T细胞 新型冠状病毒
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法|TECHNIQUES & METHOD
• 页码范围: 306-313
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.11844/cjcb.2022.02.0010

摘要

该研究旨在利用hACE2真核表达载体,通过电转法获得具有新型冠状病毒易感性的稳定表达hACE2的293T细胞株.将线性表达质粒pCMV-hACE2电转至293T细胞,经潮霉素B筛选后,利用间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、Western blot、流式分析法鉴定hACE2的表达,S-RBD蛋白和SARS-CoV-2假病毒分析细胞功能活性.利用250 μg/mL潮霉素B筛选获得了稳定高表达hACE2的细胞系293T-hACE2-D4.在该细胞中,RT-PCR检测到了大量hACE2基因的mRNA,Western blot、间接免疫荧光和流式分析法检测细胞表面hACE2蛋白表达情况(阳性细胞率为86.86％).功能分析中,293T-hACE2-27-D4细胞不仅能够与SARS-Cov-2 S-RBD蛋白相结合(结合率达84.26％),并且能够成功感染新型冠状病毒假病毒.该研究构建的稳定表达hACE2的293T细胞不仅能与S-RBD蛋白结合,还对新冠假病毒具有易感性,是探究病毒感染机制的有利工具.