重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a的制备及其在tPA突变体纯化中的应用

• 作者: 屈贤铭 杨胜利 王新
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a 高效表达 亲和层析 tPA突变体(NTA)
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 420-423
• 页数: 4页
• 分类号: Q789|Q503
• 字数: 2326字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.03.019

摘要

将基因工程菌株E.coli BL21(DE3) pET22b-mETIa高密度发酵,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,重组刺桐胰蛋白酶抑制剂a(rETIa)蛋白在E.coli 中得到较高水平表达,表达量占菌体总蛋白的40%以上.经菌体破碎、包涵体变性、复性,二步柱层析纯化得到电泳纯的rETIa蛋白.测得rETIa对t-PA突变体(NTA)的抑制平衡常数Ki为8.72×10-8 mol/L.据此利用纯化的rETIa蛋白制备rETIa-Sepharose 4B亲和层析柱.直接一步纯化NTA复性液,纯化的NTA纯度达90 %以上,收率为96.2 %,纯化倍数为13.2,比活为(565.7±71.3) U/μg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王新	中国科学院上海生物工程研究中心	78	4518	31.0	67.0
2	杨胜利	中国科学院上海生物工程研究中心	71	1074	15.0	31.0
3	屈贤铭	中国科学院上海生物工程研究中心	8	245	6.0	8.0