重组mOP-1原核细胞高效表达和纯化的研究

• 作者: 吕振华 孙立江 李延江 郑宝钟
• 来源期刊: 青岛大学医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 重组mOP-1 克隆,分子 开放读框 原核表达 分离和提纯
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 66-67,69
• 页数: 3页
• 分类号: R373
• 字数: 1621字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-4488.2004.01.024

摘要

①目的探讨重组mOP-1(rmOP-1)的克隆化、原核高效表达载体的构建以及rmOP-1制备和纯化简单有效方法.②方法于胎龄为2周的CD-1小鼠胚胎组织中提取、纯化mRNA,应用ligo(dT)引物反转录酶合成cDNA,PCR筛选扩增OP-1全长开放读框,产物TA克隆入质粒载体pCR 3.1-Uni;亚克隆入高效原核表达载体pTrcHis 2B,经大肠杆菌JM109、IPTG诱导表达rmOP-1蛋白;经Ni-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析.③结果限制性酶切分析、DNA测序确认mOP-1的全长开放读框,Ni-NTA亲和层析纯化重组蛋白PAGE分析满意. ④结论胚胎期约2周的CD-1小鼠有OP-1 mRNA的高水平表达,RT-PCR筛选OP-1全部开放读框,产物TA克隆化方法便捷,原核高效表达质粒pTrcHis 2B能够方便、快速回收和纯化重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙立江	青岛大学医学院附属医院泌尿外科	130	292	8.0	11.0
2	李延江	山东大学齐鲁医院泌尿外科	5	23	4.0	4.0
3	郑宝钟	山东大学齐鲁医院泌尿外科	27	282	8.0	16.0
4	吕振华	青岛大学医学院附属医院分子生物学实验室	33	114	7.0	9.0