结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达载体构建及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 张勇 杨登科 江军 闫天中 靳风烁
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 结核杆菌 Ag85B 质粒 原核表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 313-316
• 页数: 4页
• 分类号: Q782
• 字数: 2423字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2004.04.020

摘要

目的构建结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌(E.coli)中诱导表达.方法以质粒pUC18/Ag85B为模板,用PCR法扩增结核杆菌Ag85B基因,扩增的Ag85B上游含有EcoR Ⅰ酶切位点,下游含有SaLⅠ酶切位点;将Ag85B基因定向插入质粒pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并转化E.coli BL21,筛选阳性重组子,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定,异丙基硫代半乳糖苷(IPG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定结果.结果成功构建原核表达质粒pGEX-Ag85B并表达出MX约56000大小的Ag85B/GST融合蛋白,表达量占总菌体的30%.结论为进一步进行纯化Ag85B蛋白和研究其在膀胱肿瘤治疗中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张勇	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	97	606	14.0	19.0
2	杨登科	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	8	28	3.0	5.0
3	靳风烁	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	250	1228	15.0	23.0
4	江军	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	134	692	14.0	17.0
5	闫天中	第三军医大学大坪医院野战外科研究所泌尿外科	4	10	2.0	3.0