登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究

• 作者: 李劲松 陈亚洁
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 登革病毒 非结构蛋白NS3 NTPase 原核表达
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 890-894
• 页数: 5页
• 分类号: Q93
• 字数: 4004字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.11.008

摘要

目的表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase/RNA解旋酶结构域(dNS3),纯化表达产物并对其活性作初步研究.方法提取感染登革2型病毒的BHK-21细胞总RNA,RT-PCR扩增目的基因,经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a,转化宿主菌BL21(DE3),优化诱导表达条件,SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白.表达产物经亲和层析纯化,超滤浓缩脱盐,孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性.结果成功构建重组表达载体pET28a-dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达,纯化产物经测定具有良好的NTPase活性及抗原性.体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5(RDRP)对dNS3的ATPase活性有促进作用,提示在病毒复制时NS3与NS5间的相互作用对NS3的生物活性及对病毒复制过程可能具有调控作用.结论本研究为基于抑制NS3 NTPase/RNA解旋酶活性的抗病毒药物的筛选提供了实验依据.