rLTB/rCTB-rOmpL1/1融合基因及其原核表达系统的构建和鉴定

• 作者: 严杰 李淑萍 李立伟 毛亚飞 罗依惠 阮萍
• 来源期刊: 浙江大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 钩端螺旋体,问号 ompL1基因 大肠埃希菌 ltB基因 霍乱弧菌 ctB基因 序列同源性,核酸 序列同源性,氨基酸 克隆,分子 rLTB-rOmpL1/1/免疫学 rCTB-rOmpL1/1/免疫学
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 专题报道
• 页码范围: 21-26
• 页数: 6页
• 分类号: R377|Q784
• 字数: 4235字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2005.01.005

摘要

目的:构建ltB/ctB-ompL1/1融合基因及其原核表达系统,鉴定表达产物的免疫和佐剂活性,检测问号钩端螺旋体(简称钩体)野生株ompL1基因的携带和表达情况及钩体患者血清特异性抗体水平.方法:采用连接引物PCR构建ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因,常规方法构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE、Western blot和GM1-ELISA分别检测目的重组蛋白rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达量、免疫反应性及与GM1结合的活性.采用PCR和MAT分别检测97株问号钩体野生株ompL1基因及其表达情况.采用ELISA检测228例钩体患者血清ompL1基因产物的抗体.结果:与报道的相关序列比较,ltB-ompL1/1和ctB-ompL1/1融合基因核苷酸和氨基酸序列相似性,分别为99.7%～99.9%和99.5%～100%.rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1表达产量均约为细菌总蛋白的10%,主要以包涵体形式存在.rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1均分别能与rOmpL1/1兔抗血清和牛GM1结合.89.7%问号钩体野生株含有ompL1基因,87.6%问号钩体野生株分别与rOmpL1/1和rOmpL1/2兔抗血清出现效价,为1:4～1:256的MAT阳性结果.86.8%和88.6%的患者血清标本rOmpL1/1和rOmpL1/2抗体阳性.结论:rLTB-rOmpL1/1和rCTB-rOmpL1/1融合蛋白有良好的免疫原性及与GM1结合的活性.不同问号钩体血清群中广泛存在ompL1基因并高频率表达,不同基因型表达产物有广泛的交叉抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阮萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	24	101	6.0	9.0
3	严杰	浙江大学医学院病原生物学教研室	265	1149	14.0	20.0
4	毛亚飞	浙江大学医学院病原生物学教研室	41	232	9.0	12.0
5	李立伟	浙江大学医学院病原生物学教研室	34	277	7.0	15.0
6	李淑萍	浙江大学医学院病原生物学教研室	16	109	6.0	10.0
7	罗依惠	浙江大学医学院病原生物学教研室	14	68	6.0	7.0