人canstatin基因原核载体构建及其重组蛋白的表达纯化

• 作者: 何小平 屠振兴 李兆申 潘雪 金晶 高军 龚燕芳
• 来源期刊: 医学研究生学报
• 学科: 生物学
• 关键词: canstatin 血管生成 基因克隆
• 年，卷（期）: 2005,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 981-985
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-8199.2005.11.007

摘要

目的:构建人血管能抑素canstatin基因原核表达载体,表达并纯化出其重组蛋白.方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增canstatin cDNA,克隆进质粒pUCm-T,转化E coli DH5α,测序正确后,酶切目的基因片段,插入质粒pET-22b(+),转化E.coli BL21,IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化重组蛋白.结果:电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因canstatin长度一致.RT-PCR纯化产物与载体pUCm-T连接后,经蓝白斑筛选,挑出6个白色菌落做酶切鉴定.其中一个菌落被证实为阳性克隆,测定其基因序列,结果显示与Genbank公布的canstatin基因序列完全一致.将canstatin cDNA,插入质粒pET-22b(+),转化E.coli BL21,培养过夜后,挑选7个白色菌落做酶切鉴定,证实均为阳性克隆.IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白,SDS-PAGE电泳分析表明,在相对分子质量24000左右出现新的蛋白表达条带,诱导1、2、3、4 h后,表达蛋白分别占菌体总蛋白的18.2%、18.8%、23.0%和23.4%.将诱导3 h的菌体超声破碎后,Ni柱亲和层析,125和250 mmol/L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带.结论:成功构建人canstatin基因原核表达载体,表达并纯化出canstatin重组蛋白,为深入研究其临床应用打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李兆申	第二军医大学附属长海医院消化内科	1030	7581	34.0	55.0
2	屠振兴	第二军医大学附属长海医院消化内科	90	564	13.0	20.0
3	龚燕芳	第二军医大学附属长海医院消化内科	120	602	12.0	17.0
4	潘雪	第二军医大学附属长海医院消化内科	28	141	6.0	11.0
5	高军	第二军医大学附属长海医院消化内科	91	287	9.0	10.0
6	金晶	第二军医大学附属长海医院消化内科	47	145	7.0	8.0
7	何小平	第二军医大学附属长海医院消化内科	3	8	2.0	2.0