人层粘连蛋白α4链LG4-5组件的原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 何凤田 张玉静 戴旭芳 江渝 连继勤
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: hLNα4LG4-5 克隆 表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2005,（17）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1729-1731
• 页数: 3页
• 分类号: Q503|Q51|Q786
• 字数: 2754字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2005.17.004

摘要

目的利用基因工程技术克隆、表达人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(human laminin alpha4 LG4-5 module,hLNα4LG4-5)蛋白并制备其特异性多克隆抗体.方法采用RT-PCR方法从人胎盘组织扩增hLNα4LG4-5的cDNA片段,T/A克隆法将其插入pMD-18T载体进行测序.采用DNA重组技术构建原核表达载体pET-28a-LG4-5,用BL21(DE3)/pET系统表达hLNα4LG4-5融合蛋白,以SDS-PAGE鉴定所表达的融合蛋白.用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹法检测抗体的特异性.结果成功克隆了hLNα4LG4-5的cDNA片段,12%SDS-PAGE电泳检测显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET28a-LG4-5总蛋白中出现一条分子质量为42×103的新蛋白带,制备了效价为1:10 240的hLNα4LG4-5多克隆抗体,Western印迹分析证实可检测到特异性目的蛋白带.结论克隆并原核表达了hLNα4LG4-5蛋白,制备了特异性抗hLNα4LG4-5的多克隆抗体,为进一步研究LG组件在疾病发生中所起的作用打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玉静	解放军军需大学军事兽医系生物化学与分子生物学教研室	41	247	9.0	14.0
2	戴旭芳	重庆师范大学特殊教育学院	25	110	5.0	10.0
3	何凤田	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	127	592	12.0	15.0
4	江渝	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	42	305	10.0	15.0
5	连继勤	第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室	32	122	7.0	9.0