稳定表达EGFR-GFP融合蛋白细胞系的建立

• 作者: 叶庆 吴砂 彭吉林 曹利民 李文涵 沈关心 王敏 赵晓平 赵晓蓉
• 来源期刊: 郧阳医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 表皮生长因子受体 绿色荧光蛋白 细胞系
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-132,封二
• 页数: 5页
• 分类号: R813.2
• 字数: 2783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-9674.2006.03.001

摘要

目的:建立稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系.方法:CaCl2法将pEGFR-EGFP质粒转化DH5α,酶切鉴定后提取质粒经电穿孔转染CHO-K1细胞;以EGFP作为荧光报告分子,克隆化培养以获取单克隆阳性细胞;流式细胞术、荧光显微镜术、Western Blot检测转染细胞EGFR-GFP融合蛋白的表达;比较稳定转染细胞及未转染细胞的生长曲线;反复冻存、复苏、传代鉴定细胞表达EGFR-GFP融合蛋白的稳定性.结果:获得1株稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系,命名为CHO-EGFR-GFP1,融合蛋白主要表达于细胞膜.稳定转染细胞和未转染细胞生长特性无显著差异.结论:成功获得膜表面稳定表达EGFR-GFP融合蛋白的细胞系,为研制以EGFR为靶点的抗肿瘤药物以及研究EGFR与其配体间相互作用奠定了基础.