分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗的构建和表达

• 作者: 刘洪波 吴少庭 甘燕 秦莉 蔡昌学
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白 Ag85B ESAT-6 重组卡介苗 穿梭质粒
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1064-1067
• 页数: 4页
• 分类号: R378.911
• 字数: 3391字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2006.10.004

摘要

目的 构建分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗.方法 PCR扩增结核分枝杆菌热休克蛋白60(hsp60)的调控序列和合成T4转录终止序列,分别定向克隆入pBCG2000载体的多克隆位点的上下游,得到E.coli-Mycobacterium穿梭载体质粒pBCG3000.PCR分别扩增出结核分枝杆菌分泌性抗原Ag85B的全编码序列及ESAT-6基因,然后将两基因融合插入pBCG3000载体的hsp60启动子下游得到pBCG3000-85B-ESAT-6分泌性表达质粒.用电穿孔法将pBCG3000-85B-ESAT-6质粒转化BCG细胞,得到重组卡介苗.重组卡介苗经热诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定融合蛋白85B-ESAT-6的表达及其免疫学活性.结果 通过PCR、酶切以及测序鉴定,pBCG3000-85B-ESAT-6表达质粒构建完全正确,SDS-PAGE电泳未能直接观察到表达的融合蛋白条带,用ESAT-6蛋白的多抗血清通过Western blotting证实了该蛋白主要分泌性表达于胞外并具有免疫学活性.结论 分泌性表达融合蛋白85B-ESAT-6重组卡介苗构建成功.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴少庭	深圳市疾病预防控制中心分子生物室	72	281	9.0	12.0
2	刘洪波	华中科技大学同济医学院病原生物学系	5	37	2.0	5.0
3	蔡昌学	华中科技大学同济医学院病原生物学系	25	128	7.0	10.0
4	甘燕	深圳市疾病预防控制中心分子生物室	7	20	3.0	4.0
5	秦莉	深圳市疾病预防控制中心分子生物室	4	11	2.0	3.0