空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因序列分析及其真核表达重组质粒的构建

• 作者: 蔡方成 邓兵 郑惠 钟敏
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 空肠弯曲菌 peblA基因 重组质粒 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2006,（7）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 644-647
• 页数: 4页
• 分类号: Q755|Q782|Q939.121
• 字数: 3823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.07.008

摘要

目的针对空肠弯曲菌基因组序列为一超变量序列,测序比较空肠弯曲菌Pen:2和Pen:19 peblA基因的同源性,以证实peblA基因的保守性.在此基础上,构建空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因真核表达重组质粒.方法以含有Kpn Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切位点的同一对引物行PCR反应,获得空肠弯曲菌Pen:2、Pen:8、Pen:19和Pen:21peblA基因DNA片段,测序比较Pen:2和Pen:19 peblA基因的同源性.并选择与格林-巴利综合征最为相关的空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因PCR产物为目的片段,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),以构建重组质粒.重组质粒经双酶切鉴定、PCR鉴定和测序确认后转染至COS-7细胞,RT-PCR方法检测其瞬时表达.对阳性克隆培养基上清中PEB1蛋白的表达用ELISA分析.结果测序证实空肠弯曲菌Pen:19 peblA基因序列与Pen:2 peblA基因序列一致.采用RT-PCR方法能够从重组质粒转染的COS-7细胞中扩增出与目的基因大小一致的DNA片段.ELISA分析表明PEB1蛋白在COS-7细胞上清中获得表达.结论空肠弯曲菌peblA基因具有良好保守性,以此成功构建的重组质粒能在COS-7细胞中表达,为空肠弯曲菌DNA疫苗的研究奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡方成	重庆医科大学儿童医院神经内科	118	617	12.0	17.0
2	邓兵	重庆医科大学儿童医院神经内科	55	429	9.0	19.0
3	郑惠	重庆医科大学儿童医院神经内科	5	20	4.0	4.0
4	钟敏	重庆医科大学儿童医院神经内科	20	56	5.0	6.0