大鼠BTCe蛋白原核表达及功能鉴定

• 作者: 周伟斌 周文中 张迪 李果 李鸿 罗敏 顾燕云 骆天红
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: BTCe蛋白 克隆 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 51-53
• 页数: 3页
• 分类号: Q816
• 字数: 1937字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2006.01.015

摘要

目的 原核表达获得大量具有生物活性的大鼠BTCe蛋白.方法 RT-PCR法从大鼠肾脏中扩增出150 bp BTCe片段,插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建质粒pGEX-BTCe.转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,亲和层析法纯化获得融合蛋白,凝血酶酶切后获得目的蛋白,经SDS-PAGE、Western blot及质谱鉴定.以0.5 nmol/L BTCe作用于3T3-L1细胞连续培养4 d,MTT法检测其促增殖能力.结果 融合蛋白以水溶性形式分泌于大肠杆菌BL-21胞浆中.酶切后的目的蛋白经质谱证实其与BTCe蛋白氨基酸序列相符;作用于3T3-L1细胞可明显促进其增殖.结论 大鼠BTCe蛋白在pGEX-4T-2原核表达载体可获得高效表达,所纯化蛋白具有促进3T3-L1细胞体外增殖的作用.