人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

• 作者: 宋方洲 杨俊霞 石华 袁成福 陈济 魏丽丽
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: MCHR2 真核表达载体 稳定转染的CHO细胞系 基因表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 32-35
• 页数: 4页
• 分类号: R338.2|R394-33|R394.3
• 字数: 3970字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2007.01.010

摘要

目的 构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系.方法 采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1(+)/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础.